In vitro predatory activity of nematophagous fungi isolated from water buffalo feces and from soil in the Mexican southeastern / Atividade predatória in vitro de fungos nematófagos isolados de fezes de búfalos e do solo no sudeste mexicano

Abstract Nematophagous fungi from the feces of water buffalo and soil from southeastern Mexico were isolated, and their in vitro predatory activity against Haemonchus contortus infective larvae (L3) (HcL3) was assessed. The fungi were isolated by sprinkling soil or feces on water agar plates. Six series of 10 Petri dishes containing a 7-day-old culture of each fungus and a series without fungi as the control were prepared. Five hundred HcL3 were added to each plate. The plates were incubated at room temperature. The average of recovered HcL3 was considered to estimate the larval reduction rate. Four nematophagous fungi isolates corresponding to Arthrobotrys oligospora, var microspora (strains 4-276, 269 and 50-80) and one identified as A. oligospora,var. oligospora (isolates 48-80) were obtained from water buffalo feces. From the soil, five isolates were isolated; three corresponded to A. musiformis (Bajío, Yumca and Macuspana isolates), and two isolates were identified as A. oligospora (Comalcalco and Jalapa de Méndez isolates). The predatory activity of isolates from water buffalo feces ranged between 85.9 and 100%. Meanwhile, the fungi from the soil ranged between 55.5 and 100% (p≤0.05). The nematophagous fungi obtained could have important implications in the control of parasites of importance in the livestock industry.

Resumo Fungos nematófagos das fezes de búfalo de água e do solo no sudeste do México foram isolados, e a atividade predatória in vitro contra larvas infectantes de Haemonchus contortus (L3) (HcL3) foi avaliada.Os fungos foram isolados por aspersão de solo e de fezes em placas de agar água. Foram preparadas seis séries de 10 placas de Petri contendo uma cultura de 7 dias de idade de cada fungo e uma série sem fungos como controle. Quinhentos HcL3 foram adicionadas a cada placa. As placas foram incubadas à temperatura ambiente. O número médio de HcL3 recuperadas foi considerado para estimar a taxa de redução larval. Quatro isolados de fungos nematófagos corresponderam a Arthrobotrys oligospora, var microspora (estirpes 4-276, 269 e 50-80) e um isolado identificado como A. oligospora, var. oligospora (isolados 48-80 de fezes de búfalo de água. Do solo, dos cinco isolados três corresponderam a A. musiformis (Bajío, Yumca e Macuspana isolados), e dois isolados foram identificados como A. oligospora (isolados de Comalcalco e Jalapa de Méndez). A atividade predatória de isolados de fezes de búfalo de água variou entre 85,9 e 100%. Enquanto isso, os fungos do solo variaram entre 55,5 e 100% (p≤0,05). Os fungos nematófagos obtidos podem ter importantes implicações nesse controle de parasitos de importância na indústria pecuária.

Immune and haematological parameters of Blackbelly ewes infected with gastrointestinal nematodes / Parámetros inmunológicos y hematológicos en ovejas Blackbelly infectadas con nematodos gastrointestinales / Parâmetros imunes e hematológicos de ovelhas Blackbelly infectadas por nematoides gastrintestinais

Abstract Background: It is necessary to identify phenotypic traits related to natural resistance against gastrointestinal nematodes (GIN) in order to know the host immunity status in productive ewes. Objetive: To determine haematological and immunological parameters (IgA and IgG) during pregnancy and lactation in Blackbelly ewes naturally infected with GIN Methods: The number of eggs per gram (EPG), packed cell volume (% PCV), plasmatic protein (PP), and peripheral eosinophils were determined during eight months. In addition, sera and saliva samples were collected to establish IgG and IgA kinetics by indirect enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Results: The results showed 2,592 ± 2,403 EPG and 22.2 ± 4.0% PCV during lactation and 595 ± 901 EPG and 25.1 ± 2.5% PCV during pregnancy. A higher percentage of Trichostrongylus colubriformis larvae were observed in pregnancy (84 to100%) than in lactation (36 to 44%). The IgA activity in serum samples showed a marked reduction (from 80 to 10%) during lambing for both Haemonchus contortus and T. colubriformis antigens. In saliva samples, IgA activity with regard to the standard decreased from 56% at 60 days to 30% at 45 days before lambing and remained low for 45 days during lactation (23 to 32% activity). The eosinophils numbers were 2.0 x 109 cells L-1 in pregnancy and remained low at 0.7 x 109 cells L-1 in lactation. Conclusion: The studied variables reflect the breakdown of immunity against GIN in Blackbelly ewes before and after lambing.

Resumen Antecedentes: La identificación del fenotipo relacionado con la resistencia contra nematodos gastrointestinales (GIN) es necesaria para conocer la inmunidad del huésped en ovejas en producción. Objetivo: Determinar los parámetros hematológicos e inmunológicos (IgA e IgG) en gestación y lactancia en ovejas Blackbelly infectadas naturalmente con GIN. Métodos: Se determinó el número de huevos por gramo de heces (EPG), se identificaron las larvas y se registró el porcentaje del volumen celular aglomerado (% PCV), proteína plasmática (PP) y eosinófilos periféricos durante ocho meses. Además, se colectó suero y saliva para determinar la cinética de IgG e IgA por medio de un ensayo inmuno-enzimático (ELISA) indirecto. Resultados: Los resultados mostraron 2.592 ± 2.403 EPG y 22,2 ± 4,0% PCV durante la lactancia y 595 ± 901 EPG y 25,1 ± 2,5% PCV durante la gestación. Se observó un mayor porcentaje de larvas de Trichostrongylus colubriformis en gestación (84 a 100%) que en lactancia (36 a 44%). La actividad de la IgA en las muestras de suero mostró una marcada reducción después del parto para ambos antígenos de Haemonchus contortus y T. colubriformis (80 a 10%). En saliva, la actividad de la IgA disminuyó de 56 a 30% del día 60 al 45 antes del parto y se mantuvo baja en los primeros 45 días de la lactancia (actividad de 23 a 32%). El número de eosinófilos fue de 2,0 x 109 células L-1 durante la gestación, y se redujo a 0,7 x 109 células L-1 en la lactancia. Conclusión: Las variables estudiadas reflejan la ruptura de la inmunidad contra GIN en ovejas Blackbelly antes y después del parto.

Resumo Antecedentes: A identificação de traços fenotípicos relacionados à resistência natural contra nematóides gastrintestinais (GIN) é necessária para saber a imunidade do hospedeiro em ovelhas produtivas. Objetivo: Determinar parâmetros hematológicos e imunológicos (IgA e IgG) em períodos de gestação e lactação em ovelhas Blackbelly naturalmente infectados com GIN. Métodos: O número de ovos por grama (EPG), volume empacotado de células (% PCV), proteína plasmática (PP) e eosinófilos periféricos foram determinados durante oito meses. Além disso, as amostras de soro e saliva foram recolhidas para determinar a cinética de IgG e IgA por ELISA indireto. Resultados: Os resultados mostraram 2.592 ± 2.403 EPG e 22,2 ± 4,0% PCV durante a lactação e 595 ± 901 EPG e 25,1 ± 2,5% PCV durante a gravidez. A percentagem mais elevada de larvas de Trichostrongylus colubriformis foi observada na gravidez (84 a 100%) do que na lactação (36 a 44%). A atividade de IgA em amostras de soro mostrou uma redução acentuada (80 a 10%) durante o parto nos antígenos de Haemonchus contortus e T. colubriformis. Em amostras de saliva, a atividade de IgA diminuiu de 56 a 30% do dia 60 ao 45 antes do parto e permaneceu baixa por 45 dias durante a lactação (atividade de 23 a 32%). O número de eosinófilos foi de 2,0 x 109 células L-1 na gravidez e manteve-se baixo, com 0,7 x 109 células L-1 na lactação. Conclusaõ: As variáveis estudadas refletem a quebra da imunidade contra GIN em ovelhas Blackbelly antes e depois do parto.

Actividad ovicida de extractos de cuatro especies de plantas contra el nematodo gastrointestinal Cooperia punctata / Ovicide activity of extracts of four plant species against the gastrointestinal nematode Cooperia punctata

El uso de plantas bioactivas representa una alternativa para el control de Cooperia punctata en el ganado de pastoreo. Los objetivos de este estudio fueron: (1) evaluar la actividad ovicida de extractos de cuatro especies de plantas contra C. punctata, (2) determinar la participación de los compuestos polifenólicos (cp) en la actividad antihelmíntica (ah) y (3) evaluar el mejor método de extracción para alcanzar una actividad ovicida. El bioensayo de inhibición de la eclosión de huevos (ieh) fue utilizado para evaluar el efecto ovicida de Leucaena leucocephala, Gliricidia sepium, Guazuma ulmifolia y Cratylia argentea; con diferentes métodos de extracción: acuoso (aq), acetona: agua (aw) y acetónico (ac). Los huevos de C. punctata fueron incubados por cuadruplicado a 0.6, 1.2, 2.4, 4.8 y 9.6 mg mL-1 de cada uno de los extractos de plantas. La participación de los cp fue determinada mediante el uso de polietilenglicol (peg). Los 12 extractos de plantas inhibieron la eclosión de huevos de modo dosis-dependiente, y las mejores concentraciones letales medias (CL50) fueron: 1.03 ± 0.17 para G. sepium-ac, y 7.90 ± 1.19 mg mL-1 para L. leucocephala-aq. Se observaron diferencias en la actividad ah según el método de extracción (P < 0.05). A mayor concentración, L. leucocephala-aq inhibió más del 50 % de la eclosión de C. punctata, entretanto, el extracto G. sepium-ac inhibió la eclosión en su totalidad. La adición de peg demostró la participación de los cp en la actividad ah de la mayoría de los extractos; no obstante, con G. sepium-ac, los cp no fueron los principales compuestos bioactivos. En general, el mejor método de extracción fue acetona:agua, pues permitió obtener una buena actividad ovicida, con un mayor rendimiento del extracto. Las tasas de inhibición sugieren que L. leucocephala y G. sepium podrían ser evaluadas con la finalidad de reducir la densidad larvaria en pastos.

Variability in the fecal egg count and the parasitic burden of hair sheep after grazing in nematode infected paddocks

This study aimed to evaluate the variability in the fecal egg count (FEC) and the parasitic burden of naive hair sheep after grazing in nematode infected paddocks. The research was carried out in Tabasco, Mexico, during two periods (August and December). In each period 32 lambs were grazed for one month on African star grass (Cynodon plectostachyus) contaminated with gastrointestinal parasitic nematodes. FEC, packed cell volume (PCV) and body weight (BW) were recorded. Gastrointestinal worms were recovered at necropsy. Data were analyzed with the MIXED procedure of SAS using a model of repeated measurements over time. A higher number of Haemonchus contortus worms was found in December (2814±838) than in August (1166±305). The opposite occurred with Cooperia curticei (2167±393 and 3638±441, respectively). The FEC and correlation coefficient in respect to the worm burden were higher in December (6516 ± 1599, r=0.83, respectively) than in August (4364±771, r=0.44, respectively). A high variability in resistance-susceptibility to gastrointestinal nematodes (GIN) occurred in Katahdin × Pelibuey lambs after grazing.

Prevalencia de parásitos gastrointestinales en ovinos sacrificados en un rastro de Tabasco, México / Prevalence of gastrointestinal parasites in slaughtered sheep at a slaughterhouse in Tabasco, Mexico

The objective of this study was to determine the prevalence of gastrointestinal parasitic nematodes in sheep at necropsy at a slaughterhouse in Tabasco, Mexico. Adult parasites from gastrointestinal tract were recovered and preserved in formaldehyde for their later counting and identification. Adult nematodes were separated by species and the final count was transformed to Log + 1 to decrease the variance. GLM procedure using SAS statistic program was performed for data analysis. Provenance, sex, physiological status, and sampling month were considered as the variation sources. From a total sample of 242 slaughtered animals necropsied for monitoring gastrointestinal parasites, 57.4% including Nematoda, Trematoda or Cestoda classes. The main identified species corresponded to Haemonchus contortus in the abomasum. Cooperia curticei, Trichostongylus colubriformis, Strongyloides papillosus and Bunostomum trigonocephalum were found in the small intestine and Oesophagostomum columbianum, and Trichuris ovis in the large intestine. Fasciola hepatica and Moniezia expansa were the Trematoda and Cestoda parasites found in liver and small intestine, respectively with prevalence lower than 7%. The average of the total count of adult nematodes in the gastrointestinal tract of the infested animals was 2175 ± 445. Among the factors studied, the slaughter month and the provenance of the animals affected the prevalence of parasite infestation in sheep at slaughter. The main adult parasites found were H. contortus, C. curticei and T. colubriformis with average counts higher than 1009, 813 and 335, respectively.

El objetivo de esta investigación fue conocer la prevalencia de parásitos en ovinos sacrificados en un rastro en el estado de Tabasco. Se realizó la recuperación y conservación en formol de parásitos adultos presentes en el tracto gastrointestinal, para su posterior conteo e identificación. Los conteos de nematodos adultos por especie se transformaron a Log + 1 para disminuir la varianza, y se realizó el análisis con el procedimiento GLM del SAS en el cual se incluyeron como fuentes de variación: origen, sexo, estado fisiológico y mes de muestreo. De una muestra total de 242 animales sacrificados, se observó que 57.4% se encontraban parasitados con alguna especie de las clases Nematoda, Trematoda o Cestoda. Las principales especies identificadas correspondieron a Haemonchus contortus en abomaso. Cooperia curticei, Trichostongylus colubriformis, Strongyloides papillosus y Bunostomum trigonocephallum en intestino delgado. Oesophagostomum columbianum, y Trichuris ovis en intestino grueso. De los trematodos se encontró Fasciola hepatica en hígado y de los cestodos Moniezia expansa se localizó en intestino delgado con prevalencia menor a 7%. El conteo total de los nematodos adultos en el tracto gastrointestinal de los animales parasitados fue, en promedio, 2175 ± 445. De los factores estudiados, el mes de sacrificio y el origen de los animales afectaron la prevalencia de parasitosis en los ovinos al sacrificio. Los tres principales parásitos fueron: H. contortus, C. curticei y T. colubriformis, con conteos promedio de adultos, superiores a 1009, 813 y 335, respectivamente.

Primer informe en México sobre la presencia de resistencia a ivermectina en bovinos infectados naturalmente con nematodos gastrointestinales / First report in Mexico on ivermectin resistance on naturally infected calves with gastrointestinal nematodes

The aim of this work was to determine the presence of ivermectin anthelmintic resistance in gastrointestinal parasitic nematodes in young cattle naturally infected in the state of Campeche, Mexico. This research was performed based on a survey of sanitary management to 35 cattlemen for the selection of suspicious herds with anthelmintic resistance problems. Calves from six to 12 months age were selected because no anthelmintic treatment had been given for at least 60 days and because they showed more than 200 eggs per gram of feces (epg) before treatment. Two groups of calves from seven to 13 each were randomly chosen; control group received no treatment, and treated group received ivermectin at a dose of 0.2 mg per kg of body weight, subcutaneously. Fourteen days after treatment, the epg number was determined and infective larvae genera were taxonomically identified. Data were analyzed using RESO program for anthelmintic resistance. The results indicated a concerning problem of ivermectin anthelmintic resistance in the evaluated cattle of five ranches with levels higher than 60%. The nematode genera identified before treatment were: Cooperia spp, Haemonchus spp and Oesophagostomum sp, and after treatment Cooperia spp still remained in five ranches, followed by Oesophagostomum sp and Haemonchus spp for two of the evaluated ranches. This research shows, for the first time in the state of Campeche, anthelmintic resistance in young cattle, as well as presence of gastrointestinal nematodes resistant to ivermectin.

El objetivo del presente trabajo fue detectar resistencia a ivermectina en nematodos gastrointestinales en bovinos jóvenes infectados naturalmente en Campeche, México. El trabajo se llevó a cabo con base en una encuesta de manejo sanitario realizada a 35 ganaderos para la selección de hatos sospechosos de problemas de resistencia antihelmíntica. Becerros de seis a 12 meses de edad fueron seleccionados debido a que no habían recibido tratamiento antihelmíntico en un periodo mínimo de 60 días y porque presentaron cuentas parasitarias mayores de 200 huevos por gramo de heces (hpg), antes del tratamiento. Se formaron dos grupos de bovinos al azar, de siete a 13 animales cada uno; el grupo testigo no recibió tratamiento, y grupo tratado recibió 0.2 mg por kg de peso de ivermectina, vía subcutánea. Catorce días después del tratamiento, se determinó el número de hpg y se identificaron los géneros de larvas infectantes. Los datos se analizaron en el programa RESO para resistencia antihelmíntica. Los resultados indicaron serios problemas de resistencia a ivermectina en el ganado vacuno evaluado en cinco ranchos con niveles mayores de 60%. Los nematodos identificados antes del tratamiento, Cooperia spp, Haemonchus spp y Oesophagostomum sp, y después del tratamiento fueron Cooperia spp en los cinco ranchos, seguido por Oesophagostomum sp y Haemonchus spp para dos de los ranchos evaluados. Este trabajo muestra evidencia, por primera vez en Campeche, de resistencia a ivermectina en bovinos jóvenes, así como presencia de tres géneros de nematodos gastrointestinales resistentes a ivermectina.

Capacidad nematófaga de dos cepas del hongo Duddingtonia flagrans desarrollada en harina de maíz-agar / nematophagous capacity of two strains of the fungi Duddingtonia flagrans

El objetivo del presente estudio fue evaluar la capacidad nematófaga in vitro de dos cepas del hongo Duddingtonia flagrans, una cepa de origen francés y la otra nativa de México; con este propósito se formaron tres grupos con 17 cajas Petri cada grupo, utilizándose como medio de cultivo harina de maíz agar. En las cajas de dos de los grupos fue sembrada cada cepa, el tercer grupo sin hongos fungió como testigo; a los tres grupos se les adicionó con 150 larvas de Panagrellus redivivus , las cuales fueron extraídas a los cinco días y cuantificadas para valorar con el testigo el porcentaje de reducción larvaria. Al comparar entre sí las cepas y el grupo testigo, se observó que la diferencia fue estadísticamente significativa (P <0.05). La cepa mexicana tuvo un porcentaje de reducción larvaria de 98.9 por ciento, mientras que en la cepa francesa éste fue de 97.7 por ciento

Cryopreservation of infective larvae of Haemonchus contortus

Se evaluaron tres criopreservadores para mantener larvas infectantes (L3) de Haemonchus contortus bajo condiciones de congelación. Se emplearon tres diferentes soluciones: a) solución salina amortiguadora de fosfatos pH 7.2 (PBS); b) dimetil sulfóxido al 10 por ciento (DMSO); c) glicerina al 10 por ciento. Se colocaron 50,000 L3 por frasco y se introdujeron en nitrógeno liquido, con 10 repeticiones para cada tratamiento. Se determinó la movilidad de L3 a los 30, 90, 180 y 360 días de congelación. Los porcentajes de sobrevivencia fueron: en PBS, 36 por ciento, 20 por ciento, 7 por ciento y 39 por ciento; en DMSO, 87 por ciento, 69 por ciento, 46 por ciento y 85 por ciento; en glicerina, 67 por ciento, 62 por ciento, 29 por ciento y 55 por ciento, en cada tiempo respectivamente. También se detectó la infectividad inoculado larvas criopreservadas a becerros, en DMSO y glicerina, fueron positivos a la Hemoncosis a los 28 días post-contaminación. Con base en el estudio se concluye que el DMSO al 10 por ciento es la solución indicada para criopreservar larvas infectantes de H. contortus